FFPE样本DNA提取试剂盒无有害试剂,提高实验的安全性;自动化提取满足不同通量需求,显著提高生产率;更大程度减少手工操作时间。
FFPE样本DNA提取试剂盒提供了一种简单、快速的从石蜡包埋组织、石蜡切片组织和石蜡固定样本中提取基因组DNA的方法。石蜡组织经脱蜡处理后,配合裂解试剂释放组织中的DNA,再通过快速磁响应结合到磁珠表面,获取高度纯化的基因组DNA,可直接用于PCR、qPCR、文库构建等多种下游实验。
产品优势:
1、提取率高;
2、QPCR结果Ct值更小;
3、提取产物可用于后续PCR、QPCR分析。
FFPE样本DNA提取试剂盒的应用步骤:
1、从源头抓起,完善样本的前处理
离体时间:取材后应在30min内及时固定,防止组织变质。
样本要求:选择合适大小的组织块制作石蜡包埋组织样本,一般不**过15x10x5mm。
固定液选择:建议使用10%中性福尔马林固定液,对组织进行固定,固定液应为被固定标本体积的5-10倍,并定期更换。
固定时间:根据样本情况调节固定时间,一般在24-48h为宜,固定时间过长会加重FFPEDNA的片段化。
包埋要求:选用纯净且熔点适宜的蜡,包埋要迅速,禁用明火。
切片厚度:包埋好的组织样本根据需要确定切片厚度,标准切片厚度为4um,用于核酸提取的切片可以在10-20um,保证切片厚度的持续稳定。
2、选择合适的提取试剂盒
目前市场上有多种提取试剂盒,应选择合适的试剂盒才能保证实验的成功率。
疾病研究和病理分析中,由于通过手术、穿刺等方式处理的组织样本离开机体后,很快就会发生腐烂及组织,丧失原有正常的结构和功能。因此,离体的组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以避免细胞组织,进而进行形态结构分析及*或分子分析等。比如应用FFPE样本DNA提取试剂盒处理组织结构。
FFPE样本的特点:FFPE样本,即用福尔马林固定、石蜡包埋的组织样本。因其能更好地维持组织细胞的结构,便于研究及更好地保存样本,该方法已经被普遍应用。组织样本在前处理中的不规范操作,可能会导致不同程度的DNA损伤,影响NGS检测。
福尔马林固定石蜡包埋( Formalin Fixed andParaffin Embedde, FFPE)成为病理学、法医病理学等进行样本保存的主要手段。对组织样本进行FFPE的保存,有助于研究人员更加深入地了解经多年保存后的病理标本中所包含的遗传机制和病理成因。目前,**约有2-4亿FFPE组织样本,这些组织样本已经是疾病诊断和科学研究宝贵的的生物学资源之一。
FFPE样本DNA提取试剂盒的常见问题分析及解决方法:
从前处理、提取、建库到测序分析,FFPE样本常见问题复杂多样,其中绝大部分问题和样本直接相关,可以通过回溯实验过程及分析来优化实验。
1、文库复杂度低
原因:样本质量差:测序深度太高;
优化方法:规范前处理、核酸提取过程;检查设备状态等;调整测序深度。
2、文库片段短
原因:样本质量差;打断时间过长
优化方法:规范前处理;调整打断时间。
3、文库总量低
原因:核酸投入/杂交投入量低;样本质量差;实验操作不规范;
优化方法:投入足够量的核酸,规范实验操作。
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