体液病原DNA提取试剂盒采用核酸提取技术,配合顺磁性磁珠和特缓冲液系统,操作过程安全便捷,能够较大程度去除蛋白、脂质及其他杂质。
体液病原DNA提取试剂盒结合在硅基质膜或磁珠表面的DNA,经含醇的盐溶液漂洗可进一步去除细胞残片、非特异吸附的蛋白质和过浓的盐离子,再经纯水等洗脱液即可将纯度较高的DNA洗脱下来,进而应用于下游实验中(如pcr、酶切、连接、测序等);通过酚仿释放至溶液中的核酸,可通过调节酸碱度后加入高浓度醇溶液沉淀出来,再经醇溶液洗涤晾干后即可获得高纯度DNA。
体液中病原dna的提取步骤中,去污剂用于破坏细胞或病毒蛋白外壳或膜结构,使核酸游离到溶液中,胍盐或盐用于变性蛋白质,释放其结合的核酸并促进核酸与硅基质膜或磁珠结合,同时也具有裂解病毒外壳或膜结构的功能,如果使用溶剂,也可以破坏细胞结构,变性蛋白质进而释放核酸。
体液病原DNA提取试剂盒保存条件:常温运输和保存,长期放置时(1月以上)应该放4℃。且具有挥发性,使用后需要将瓶盖拧紧。
体液病原DNA提取试剂盒的操作步骤:
1、取1.5ml离心管(自备),加入20ul的Proteinase K溶液。
2、向离心管中加入200 ul血清或血浆,然后再加入200 ul BufferGB,涡旋震荡15 sec。
3、56°C孵育15 min,短暂离心,将管壁上的溶液收集到管底。
4、加入250ul无水乙醇,涡旋震荡15sec,室温放置5 min,短暂离心,将管壁上的溶液收集到管底。
5、将一个Spin Columns CG“放入Collection Tubes(2 m1) 中,将上一步所得溶液转移到离心吸附柱中,10 000 rpm离心30 sec,弃收集管中的废液。
6、向吸附柱内加入500ul 的Buffer GD,室温10 000 rpm离心30 sec,弃收集管中废液。
7、向吸附柱内加入500ul的Buffer PW,室温10000rpm 离心30 sec,弃收集管中废液。
8、向吸附柱中加入500ul 无水乙醇,10000 rpm离心30 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9、室温12000rpm离心3min,甩干残留液体。
10、将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml塑料离心管中,小心打开吸附柱的盖子,室温放置3 min,使吸附膜完全变干。加入30~ 100ul的洗脱液,室温放置2~ 5 min。12000 rpm离心1min,离心管底溶液即DNA。
DNA的分子生物学技术可以用于病源检测、遗传疾病检测、检测、系统进化、物种起源等常用的手段。目前的各种核酸分子生物学技术,包括荧光定量pcr、数字pcr、下一代测序等都获得了大量的进展。但是,这些技术检测结果良好都是以核酸纯化回收效率为前提的。好的DNA纯化技术,应当具备简便、安全、廉价的特点,且回收到的核酸应达到足够的浓度和纯度。
体液病原DNA提取试剂盒的产品优势:
1、质量优:DNA提取产量高,纯度好,有效去除杂质和下游PCR抑制因子,有效控制外源致病污染;
2、无偏性:无偏倚的微生物核酸提取,兼容多种病原类型,较大程度避免样本中微生物损失;
3、应用广:广泛兼容肺泡灌洗液、痰液、拭子等生物液体样本;
4、高兼容:兼容手动提取及自动提取程序,适配Tecan、Hamilton、PE等核酸提取工作站。
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