血浆病原DNA提取试剂盒在操作简便性上具有一定优势,更适合于较多样本的检测。对纯度要求较高的实验,可根据实验需求进行选择。
血浆病原DNA提取试剂盒的操作步骤:
1、取出洗涤液,按以下操作:
洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇;42mL加入18mL无水乙醇,混匀。
洗涤液B:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇,混匀。
配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。
2、取1.5mL离心管,加入200μL血液样本,再加入200μL 裂解液及40μL 消化液,振荡混匀,65℃水浴10 分钟。
3、加入150μL异丙醇(总体积的25%),混合均匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。
4、将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,12,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液;
5、将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液A至吸附柱内,12,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。
6、将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。
7、按每份样本40μL 取洗脱液,放置于灭菌1.5mL离心管,65℃预热。
8、将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 离心2 分钟,离去残留的洗涤液。
9、取出吸附柱,放入新的1.5 mL 灭菌离心管内,在吸附柱中心加入40 μL 预热洗脱液,静置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
游离DNA提取方法一般有TRizol方法、离心柱法、磁珠法。其中,Trizol方法与离心柱相比,提取效果相当,但是因其对操作者带来的毒性,现在越来越被弃用。磁珠法比较适合机器自动化提取,如果没有核酸提取仪,只是使用磁力架配套提取,磁珠法的操作就比较麻烦且容易导致样本交叉污染。另外,根据研究,磁珠法的核酸提取得率不如离心柱法。如果要提取的游离核酸的量比较低,选择离心柱法。对于游离DNA含量较低的样本或比较珍贵的样本或样本总数不是很多的实验室,核酸提取方法应是离心柱法。
血浆病原DNA提取试剂盒产品特点:
1、操作简便快速,20分钟左右可获得理想的DNA;
2、提取DNA纯度高,无抑制剂,1.7<A260/A280≤2.0;
3、产量更高,较国内同类产品高出20%;
4、样本范围广,可用于新鲜、冷冻或陈旧的全血样本。
选择血浆病原DNA提取试剂盒也取决于你需要多少DNA?
大多数DNA分离试剂盒公司都提供含有类似成分的试剂盒,这种试剂盒可以根据处理样品的体积进行缩放。对于特别的应用,当涉及到培养物或组织样本的数量时,选择可能较少。
小量制备:>15 mL
中量提取:15-25 mL
大规模制备:100-200 mL
巨型制备:500-2,500 mL
甚**达2.5-5升。
血浆病原DNA提取试剂盒使用注意事项:
1、裂解液、洗涤液含有一定性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入鼻和口中。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。
2、如血液量不足200μL,请用0.85% 生理盐水补至200μL;如血液量**出200μL,请使用中量血液DNA提取试剂盒或血液富集DNA提取试剂盒。
3、如果提取的血液为鸟类、禽类的血液,因有核红细胞较多,提取血液量应适当减少,研究者应该进行优化实验,选择合适用量。
4、提取的DNA如暂不使用,应-20℃保存。
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