FFPE样本DNA提取试剂盒无有害试剂,提高实验的安全性;自动化提取满足不同通量需求,显著提高生产率;更大程度减少手工操作时间。
FFPE样本DNA提取试剂盒的常见问题分析及解决方法:
从前处理、提取、建库到测序分析,FFPE样本常见问题复杂多样,其中绝大部分问题和样本直接相关,可以通过回溯实验过程及分析来优化实验。
1、文库复杂度低
原因:样本质量差:测序深度太高;
优化方法:规范前处理、核酸提取过程;检查设备状态等;调整测序深度。
2、文库片段短
原因:样本质量差;打断时间过长
优化方法:规范前处理;调整打断时间。
3、文库总量低
原因:核酸投入/杂交投入量低;样本质量差;实验操作不规范;
优化方法:投入足够量的核酸,规范实验操作。
FFPE样本DNA提取试剂盒的产品优势:
1、高纯:提取基因组DNA产量高、纯度好,蛋白和RNA污染低;
2、兼容:适用于各种不同FFPE组织样本及低质量样本的提取;
3、安全:操作简单,无酚、氯仿等溶剂;
4、自动化:兼容手动提取及自动化提取程序。
FFPE样本DNA提取试剂盒的应用步骤:
1、从源头抓起,完善样本的前处理
离体时间:取材后应在30min内及时固定,防止组织变质。
样本要求:选择合适大小的组织块制作石蜡包埋组织样本,一般不**过15x10x5mm。
固定液选择:建议使用10%中性福尔马林固定液,对组织进行固定,固定液应为被固定标本体积的5-10倍,并定期更换。
固定时间:根据样本情况调节固定时间,一般在24-48h为宜,固定时间过长会加重FFPEDNA的片段化。
包埋要求:选用纯净且熔点适宜的蜡,包埋要迅速,禁用明火。
切片厚度:包埋好的组织样本根据需要确定切片厚度,标准切片厚度为4um,用于核酸提取的切片可以在10-20um,保证切片厚度的持续稳定。
2、选择合适的提取试剂盒
目前市场上有多种提取试剂盒,应选择合适的试剂盒才能保证实验的成功率。
福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)是组织样本常见的保存方式,FFPE样本DNA提取试剂盒采用具有特有分离作用的纳米磁珠和特制的缓冲液系统,可从FFPE样品中提取高质量的基因组DNA。
FFPE样本DNA提取试剂盒的操作过程便捷,提取的核酸得率高,质量稳定可靠,可供PCR、实时荧光定量PCR、二代测序等使用。FFPE样本DNA提取试剂盒是基于磁珠法的分离系统,适用于高通量的自动化提取流程。
随着基因组学检测技术的快速发展,尤其新一代测序技术 (NGS) 的飞速发展,在细胞分子水平提供了新的的检测能力,研究人员可以使用这一技术手段,重新开启FFPE样本宝藏的大门,寻找疾病与基因关系,进而去解释疾病的未解之谜。然而,在FFPE组织标本的制备和贮存过程中,组织经福尔马林固定、石蜡包埋后很容易引起DNA的交联和降解,研究人员很难获得足量的高质的DNA样本,这也对新的检测技术提出新的要求。
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