FFPE样本DNA提取试剂盒能配合裂解试剂释放组织中的DNA,再通过快速磁响应结合到磁珠表面,获取高度纯化的基因组DNA。
福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)是组织样本常见的保存方式,FFPE样本DNA提取试剂盒采用具有特有分离作用的纳米磁珠和特制的缓冲液系统,可从FFPE样品中提取高质量的基因组DNA。
FFPE样本DNA提取试剂盒的操作过程便捷,提取的核酸得率高,质量稳定可靠,可供PCR、实时荧光定量PCR、二代测序等使用。FFPE样本DNA提取试剂盒是基于磁珠法的分离系统,适用于高通量的自动化提取流程。
FFPE样本DNA提取试剂盒的应用步骤:
1、从源头抓起,完善样本的前处理
离体时间:取材后应在30min内及时固定,防止组织变质。
样本要求:选择合适大小的组织块制作石蜡包埋组织样本,一般不**过15x10x5mm。
固定液选择:建议使用10%中性福尔马林固定液,对组织进行固定,固定液应为被固定标本体积的5-10倍,并定期更换。
固定时间:根据样本情况调节固定时间,一般在24-48h为宜,固定时间过长会加重FFPEDNA的片段化。
包埋要求:选用纯净且熔点适宜的蜡,包埋要迅速,禁用明火。
切片厚度:包埋好的组织样本根据需要确定切片厚度,标准切片厚度为4um,用于核酸提取的切片可以在10-20um,保证切片厚度的持续稳定。
2、选择合适的提取试剂盒
目前市场上有多种提取试剂盒,应选择合适的试剂盒才能保证实验的成功率。
FFPE样本DNA提取试剂盒为福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)组织样品中的总RNA和基因组DNA的连续分离和纯化提供了一种快速方法。使用该试剂盒将RNA和DNA依次纯化成单的组分。能够纯化大部分的RNA,从大的mRNA和核糖体RNA到microRNA和小干扰RNA,取决于FFPE组织的年限,因为RNA的片段化程度将随着时间增加。在不使用或氯仿的情况下从其他细胞组分中纯化RNA。纯化的RNA具有较高的完整性,可用于许多下游应用,包括实时PCR,逆转录PCR,RNA印迹,RNA酶保护和引物延伸,以及表达谱测定。纯化的基因组DNA也具有较高质量,可用于PCR反应,测序,Southern印迹和SNP分析。
疾病研究和病理分析中,由于通过手术、穿刺等方式处理的组织样本离开机体后,很快就会发生腐烂及组织,丧失原有正常的结构和功能。因此,离体的组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以避免细胞组织,进而进行形态结构分析及*或分子分析等。比如应用FFPE样本DNA提取试剂盒处理组织结构。
FFPE样本的特点:FFPE样本,即用福尔马林固定、石蜡包埋的组织样本。因其能更好地维持组织细胞的结构,便于研究及更好地保存样本,该方法已经被普遍应用。组织样本在前处理中的不规范操作,可能会导致不同程度的DNA损伤,影响NGS检测。
FFPE样本DNA提取试剂盒使用中为什么要脱蜡?
如果要对FFPE组织进行分子生物学研究,开始的就是要进行DNA的提取。 但是固定剂的交联作用对核酸是有害的,福尔马林石蜡和交联作用会妨碍核酸的提取,抑制DNA聚合酶的活性从而影响PCR扩增。除此之外,石蜡阻碍消化液对组织的渗透,从而抑制蛋白酶K和组织内蛋白的接触,影响组织消化和DNA释放。所以为了消除石蜡对DNA提取和PCR扩增的不良影响,必须在保证不增加外源性PCR抑制因子,并尽量减少DNA额外损伤的前提下对组织进行彻底脱蜡。
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