血浆病原DNA提取试剂盒的操作简便性也是血浆DNA提取试剂选择的一个重要因素。操作过于复杂,不仅费时费力,还容易导致样本间的交叉污染,也容易损失样本。
血浆病原DNA提取试剂盒的优势:
1、从血液样本中分离基因组DNA,线粒体DNA,病毒DNA等;
2、样本制备时间少;
3、纯化的DNA具有优异的质量和产量,并且可应用于很多下游应用,包括PCR、qPCR、测序、基因分型、病毒检测、Southern印迹分析。
血浆病原DNA提取试剂盒有较高的提取得率。核酸提取得率的确定,常用的是使用紫外分光光度计的方法。但是,血清、血浆样本中游离核酸含量较低,如果直接用紫外法检测,得出的数值并不准确,而且多次测量的结果会变异很大。关于提取得率,1ml正常血浆样本cfDNA得为7.35ng左右,但如果白细胞大量凋亡,血浆中的游离DNA量会有所增加,病人血浆中的DNA会大幅增加。
血液游离DNA(又称血液循环DNA)是指血液中游离于细胞外的DNA,其来源主要有三:白细胞崩解释放的DNA、坏死组织特别是肿 瘤组织释放入血液的DNA和感染病毒等的DNA。近几年来,随着基因诊断技术的发展,游离核酸的应用价值越来越大,如优生筛查、早期诊断、遗传病检测和病原体感染基因检测等。但血液中游离DNA含量一般较低,片段较小,不易提取,这大大影响了游离核酸的基因检测和各种研究的开展。
实验室工作中,经常会需要用到纯化的DNA,这时我们通常需要使用一个商业的DNA提取试剂盒对目的DNA进行分离纯化。市面上有很多类型的提取试剂盒,当使用不太熟悉的样本类型时,选择合适的盒子是尤为关键的。
目前大多数DNA提取试剂盒遵循相同的基本步骤:裂解、柱纯化、洗涤杂质、柱洗脱。然而,不同的盒子在完成每个步骤的方式上有很大的不同。
血浆病原DNA提取试剂盒采用特别的裂解液配方,可直接从新鲜、冷冻或陈旧的全血中提取高质量的基因组DNA,也可以直接提取得到血液中感染的细胞DNA, 省去了一般血液DNA提取试剂盒所需的白细胞分离步骤,操作简便快速,只需几十分钟左右即可完成血液DNA提取,并且DNA提取得率较高,可在200 μl 全血中提取2-5ug左右基因组DNA。血浆病原DNA提取试剂盒采用了较新的优良离子膜、裂解液和洗脱液,经过多次优化,提取得到的DNA纯度更高,较大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于PCR、荧光定量PCR和各种酶切试验等。
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