血浆病原DNA提取试剂盒的操作简便性也是血浆DNA提取试剂选择的一个重要因素。操作过于复杂,不仅费时费力,还容易导致样本间的交叉污染,也容易损失样本。
血浆病原DNA提取试剂盒中时间成本、生产率的考虑:
当一次处理**过50个样本时,不再考虑使用小量柱纯化,高通量DNA提取试剂盒是更好的选择,它可以以96孔的形式运行,以便在需要同时处理多个样本的DNA的实验。
DNA提取试剂盒有各种规格和大小,然而,共同的主线是,所选择的试剂盒能产生干净和浓缩的DNA。可以定期评估DNA提取物的数量和质量,以确保试剂盒适合此应用类型。
实验室工作中,经常会需要用到纯化的DNA,这时我们通常需要使用一个商业的DNA提取试剂盒对目的DNA进行分离纯化。市面上有很多类型的提取试剂盒,当使用不太熟悉的样本类型时,选择合适的盒子是尤为关键的。
目前大多数DNA提取试剂盒遵循相同的基本步骤:裂解、柱纯化、洗涤杂质、柱洗脱。然而,不同的盒子在完成每个步骤的方式上有很大的不同。
一般来说,血清血浆的量与提取的核酸量成正比。因而,如果要提高核酸得率,可通过增加血清或血浆的量来实现。一般地,做血浆或血清核酸提取,样本量在1ml以上。如果1ml或更大量样本得不到满意的检测结果,则应及时考虑更换提取试剂盒。血浆病原DNA提取试剂盒的核酸提取得率较高,1ml病人血浆样本DNA得率在85ng左右,Q的得率在72ng左右,T的得率在63ng左右,基本上都能满足下游PCR实验的需求。其检测下限为2ng/ul。如洗脱液为30ul,则需要1ml左右的血浆才能检测出来。显然,如果是健康人的血浆,1ml血浆的DNA浓度更低。因而,血浆DNA提取完成以后,应该直接做PCR。
血浆病原DNA提取试剂盒采用特别的裂解液配方,可直接从新鲜、冷冻或陈旧的全血中提取高质量的基因组DNA,也可以直接提取得到血液中感染的细胞DNA, 省去了一般血液DNA提取试剂盒所需的白细胞分离步骤,操作简便快速,只需几十分钟左右即可完成血液DNA提取,并且DNA提取得率较高,可在200 μl 全血中提取2-5ug左右基因组DNA。血浆病原DNA提取试剂盒采用了较新的优良离子膜、裂解液和洗脱液,经过多次优化,提取得到的DNA纯度更高,较大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于PCR、荧光定量PCR和各种酶切试验等。
一般来说,质粒DNA分离要比基因组DNA分离温和。这是因为针对质粒DNA的裂解步骤需要染色体DNA与细胞蛋白片段保持结合,以防止其污染终的样品。两种类型的DNA回收都有试剂盒,甚至有可以同时纯化基因组DNA和总RNA的试剂盒。
当使用血浆病原DNA提取试剂盒分离不同血液体积样本时,能表现得更好,在于提取更高的DNA产量和纯度。
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